Entwicklung und Optimierung eines Real-Time PCR Screening-Systems

In der vorliegenden Arbeit wurde ein Real-Time PCR Screening-System zum Nachweis von Lactobacillen / Pediococcen basierend auf spezifischen Identifizierungsprimern entwickelt und optimiert. Es wurden Versuche zu den Kreuzreaktionen und Nachweisgrenzen der Primer durchgeführt.

Dadurch wurde die Praxistauglichkeit der spezifischen Identifikationsprimer, sowohl einzeln zur Identifaktion als auch kombiniert in einem Screening-System basierend auf TaqMan-Sonden bestätigt. Davon ist der mit col1 bezeichnete Primer aufgrund seiner zahlreichen Kreuzreaktionen als einziger auszunehmen. Beim Nachweis von Pediococcus damnosus wird für das Screening-System der ped Primer aufgrund seiner niederigeren Nachweisgrenze genutzt, für die Identifikation sollte der ped1 Primer herangezogen werden, er gewährleistet eine höhere Spezifität durch weniger ausgeprägte Kreuzreaktionen.

Das blc2p4 Screening-System basierend auf den spezifischen Identifizierungsprimern detektiert mit einer ausreichenden Nachweisgrenze spezifisch die gewünschten Mikroorganismen (L. brevis, L. lindneri, L. coryniformis, L. casei, L. plantarum, L. parabuchneri, P. damnosus, M. cerevisiae und P. spp). Die Kombination des blc2p4 mit dem 630C System und einer internen Positivkontrolle führte zu mangelhaften Ergebnissen.

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